Forskjell mellom Maxam Gilbert og Sanger Sequencing | Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing

Nøkkelforskjell - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing

Nukleotider er de grunnleggende strukturelle enhetene og byggeblokkene til DNA. DNA-molekylet er sammensatt av en polynukleotidkjede. Det finnes fire forskjellige nukleotider som finnes i DNA. Disse nukleotidene består av fire forskjellige nitrogenholdige baser kalt A (adenin), G (guanin), C (cytosin), T (tymin). Ordren av nukleotidene i DNA-molekylet har stor betydning, da den koder for en viktig genetisk informasjon for organismers vekst og utvikling. DNA-sekvensering refererer til prosessen som bestemmer DNA-presis nukleotidsekvens. Det finnes forskjellige DNA-sekvenseringsmetoder. Maxam Gilbert-sekvensering og Sanger DNA-sekvensering er to metoder for DNA-sekvensering som tilhører førstegenerasjons-sekvensering. Maxam Gilbert-sekvenseringsprosedyre bestemmer basesekvensen ved kjemisk spalting av de 5'-ende-merkede DNA-fragmentene fortrinnsvis ved hver av fire nukleotider og gelelektroforese. Sanger-sekvenseringsprosedyre bestemmer nukleotidsekvensen ved å syntetisere enkeltstrenget DNA ved bruk av DNA-polymerase og dideoxynukleotider og gelelektroforese. Dette er nøkkeldifferansen mellom Maxam Gilbert og Sanger Sequencing.

INNHOLD

en. Oversikt og nøkkelforskjell

2. Hva er Maxam Gilbert

3. Hva er Sanger Sequencing

4. Side ved side sammenligning - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing

5. Sammendrag

Hva er Maxam Gilbert Sequencing?

Maxam Gilbert-sekvensering, også kjent som kjemisk sekvenseringsmetode , er en teknikk som ble utviklet for å bestemme rekkefølgen av nukleotidene i DNA. Denne metoden ble introdusert av Walter Gilbert og Alan Maxam i 1976 og ble populær siden den kan utføres direkte med renset DNA. Maxam Gilbert-metoden tilhører den første generasjonen av DNA-sekvensering, og det var den første sekvenseringsmetoden som ble brukt av forskere.

Basisprinsippet for denne metoden ligger i begrensningen av de endemerkede DNA-fragmentene ved spesifikke baser ved basespesifikke kjemikalier og betingelser og separering av de merkede fragmentene ved elektroforese som vist i figur 01. Fragmenter separeres i henhold til deres størrelser på gelen. Siden fragmentene er merket, kan sekvensen av DNA-molekylet lett utledes.

Maxam gilbert-metoden bruker basisspesifikke kjemikalier til å bryte DNA på bestemte baser. To vanlige kjemikalier kalt dimetylsulfat- og hydrazinkjemikalier brukes til å selektivt angripe puriner og pyrimidiner.

Maxam Gilbert-sekvenseringsmetode utføres via flere trinn som følger.

Rensing av DNA-sekvensen ved bruk av restriksjonsendonukleaser
Merking av DNA-fragmentets ender ved å tilsette radioaktive fosfater
Rensing av de merkede fragmentene fra ikke-merkede fragmenter ved gelelektroforese
Separasjon av ende- merket DNA i fire rør og behandle med basespesifikke kjemikalier separat
Elektroforese av innholdet i hvert rør på separate linjer på en gel og fragmentseparasjon i henhold til deres lengde.
Deteksjon av fragmentene med autoradiograf.

Figur 01: Maxam Gilbert Sequencing

Hva er Sanger Sequencing?

Sanger Sequencing er en sekvenseringsmetode utviklet av Frederick Sanger og hans kolleger i 1977 for å bestemme basesekvensen for et gitt DNA-fragment. Det er også kjent som kjedeavslutningssekvensering eller Dideoxy-sekvenseringsmetode. Denne metoden virker på prinsippet om selektiv inkorporering av kjedeavslutende dideoxynukleotider (ddNTPer) som ddGTP, ddCTP, ddATP og ddTTP ved DNA-polymerase under syntese av enkeltstrenget DNA for å avslutte strengdannelse. Dideoxynukleotider mangler 3 'OH-grupper for dannelse av fosfodiesterbindinger med tilstøtende nukleotid. Derfor stopper strengformasjonen når en ddNTP er innlemmet i nydannende streng under sanger-sekvensering.

I denne metoden utføres fire separate DNA-syntese-reaksjoner (PCR) i fire separate rør med en type ddNTP. Andre krav leveres også for rørene til PCR, inkludert primere, dNTP, Taq polymerase, spesifikke forhold, etc. Fire separate reaksjoner utføres i fire rør med fire blandinger. Etter PCR-reaksjoner blir de resulterende DNA-fragmenter denaturert og separert ved gelelektroforese. Da visualiseres fragmentene ved å bruke enten en merket (radioaktiv eller fluorescerende) primer eller dNTP som vist i figur 02.

Figur 02: Sanger-sekvensering

Hva er forskjellen mellom Maxam Gilbert og Sanger Sequencing?

- diff Artikkel Midt før tabell ->

Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Maxam Gilbert-sekvensering er den første teknikken utviklet for DNA-sekvensering.	Sanger-sekvenseringsmetode ble introdusert etter Maxam Gilbert-sekvenseringsmetoden.
Bruk
Denne metoden brukes sjelden.	Sanger-sekvensering brukes rutinemessig til sekvensering.
Bruk av farlige kjemikalier
Det bruker farlige kjemikalier.	Bruk av farlige kjemikalier er begrenset i forhold til Maxam Gilbert-metoden.
Merking for deteksjon
Denne metoden bruker radioaktivt P ³² for merking av endene av DNA-fragmentene.	Sanger-sekvensering bruker radioaktivt eller fluorescensmerket ddNTPs.

Sammendrag - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing

Maxam Gilbert og Sanger-sekvensering er to typer DNA-sekvenseringsteknikker som kommer under første generasjon DNA-sekvensering.Maxam Gilbert-sekvensering er den første metoden som ble introdusert for DNA-sekvensering i 1976, og den utføres ved å bryte de endemerkede DNA-fragmentene med basespesifikke kjemikalier. Derfor er det kjent som kjemisk sekvensering. Sanger-sekvenseringsmetode ble introdusert i 1977, og er basert på ddNTP-drevne kjedetermineringsreaksjoner. Sanger-sekvenseringsmetode populær enn Maxam Gilbert-metoden på grunn av flere ulemper med Maxam Gilbert-metoden som for høyt tidsforbruk, bruk av farlige kjemikalier, etc. Dette er forskjellen mellom Maxam Gilbert og Sanger-sekvensering.

Referanser:

1. Maxam, A. M, og Walter Gilbert. "En ny metode for sekvensering av DNA. "Prosedyrene ved det nasjonale vitenskapsakademiet. National Acad Sciences, 9. desember 1976. Web. 30. mars 2017

2. Heather, James M., og Benjamin Chain. "Sekvensen av sekvenser: Historien til sekvensering av DNA. "Genomics. Academic Press, jan 2016. Web. 30. mars 2017

3. Pareek, Chandra Shekhar, Rafal Smoczynski og Andrzej Tretyn. "Sequencing teknologier og genom sekvensering. "Journal of Applied Genetics. Springer-Verlag, nov. 2011. Web. 30. mar. 2017

Image Courtesy:

1. "Maxam gilbert sequencing" Av flere ganger på engelsk Wikipedia (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia

2. "Sanger-sequencing" Av Estevezj - Eget arbeid (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia