Forskjell mellom valgbar markør og reportergen | Valgbar markør vs Reporter Gene
Nøkkelforskjell - Selekterbar markør vs Reporter Gene
Geneteknikksteknikk brukes til å overføre viktige gener fra organisme til annen organisme. Innsetting av et fremmed gen i en annen organisme genom og gjør den uttrykt i vertscellen er vanskeligste trinnene i genoverføring. For å oppdage suksessen til transformasjonsprosessen, anvendes en selekterbar markør og et reportergen i det rekombinante molekylet. En selekterbar markør er en DNA-sekvens eller et gen som uttrykker og selekterer de transformerte celler fra de ikke-transformerte celler. Et reportergen er et annet gen som brukes til å skille mellom transformerte celler og å kvantifisere eller oppdage hvordan det innsatte genet fungerer i verten. Hovedforskjellen mellom selekterbar markør og reportergen er at den valgbare markøren brukes til å skjerme ut de ikke-transformerte cellene og å signalere de transformerte celler mens reportergen brukes til å kvantifisere nivået av genuttrykk i verten.
INNHOLD
en. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er valgbar markør
3. Hva er Reporter Gene
4. Side ved side-sammenligning - Valgbar markør vs Reporter-gen
5. Sammendrag
Hva er en valgbar markør?
I geneteknikk settes genet av interesse inn i en egnet vektor og transformeres til vertsorganismer. Imidlertid er transformasjonen vellykket bare i de kompetente vertsceller, og det er en mulighet for vertsceller å avvise opptaket av fremmed DNA. Derfor er differensiering av de transformerte og ikke-transformerte cellene viktig for å fortsette med videre eksperimentering. Derfor innbefatter forskere et selekterbart markørgen til vektoren for lett utvalg av transformerte celler fra ikke-transformerte celler. En selekterbar markør er en DNA-sekvens, spesielt et gen som er nyttig ved identifisering av de transformerte celler. Dette markørgen utviser en egenskap som passer til et kunstig utvalg av transformerte celler fra ikke-transformerte celler på et medium.
De vanligste valgbare markørene som brukes i molekylærbiologi er antibiotikaresistente gener. Et antibiotikaresistensgen settes inn i vektoren og transformeres til vertsceller spesielt til vertsbakterien. Det bestemte antibiotika er innarbeidet i bakteriens voksende medium. På grunn av tilstedeværelsen av den selektive markøren, under de selektive betingelser, kan bare celler som inneholder den passende selekterbare markør overleve.Ikke-transformerte celler kan ikke vokse i det antibiotikumholdige medium. På grunn av den selekterbare markøren som er resistent mot antibiotika, er det derfor lett å identifisere transformerte celler.
Gener som gir egenskaper for antimetabolitter, herbicider brukes som selektive markører i kloningsvektorer i plantegenetikk. Denne kotransformasjonen av selektive markører i genetisk modifiserte organismer har imidlertid negative effekter på miljøet og mennesket. Frigivelsen av antibiotikaresistente bakterier kan øke antibiotikaresistiviteten til humane patogener. Det kan forurense produktet eller biomassen med antibiotika og kan miste det selektive trykket som følge av nedbrytning og inaktivering av antibiotika.
Figur 01: Plasmidvektor for genoverføring med selekterbar markør
Hva er et Reporter-gen?
Reportergener er gener som muliggjør deteksjon eller måling av det innsatte genuttrykket. Disse reportergenene kan bindes til regulatoriske sekvenser av genet av interesse for å signalere ekspresjonsstedet eller nivåene. Derfor, under ekspresjonen av gener under samme promotor, blir de transkribert til en enkelt mRNA-sekvens og deretter oversatt til et protein som kan indikere nivået av genuttrykk.
Reportergener er av forskjellige typer, og de inneholder visuelt identifiserbare egenskaper som vanligvis er involvert i fluorescerende og luminescerende proteiner. Gener som koder for fluorescerende protein og enzymer, konverterer usynlige substrater til luminescerende eller fargede produkter ved å signalisere det vellykkede genuttrykket og gi muligheten til kvantifisering av genuttrykket.
Figur 02: Reportergenuttrykk
Hva er forskjellen mellom Selectable Marker og Reporter Gene?
- diff Artikkel Midt før tabell ->
Valgbar markør vs Reporter Gene |
|
| Valgbar markør er en slags DNA-sekvens som bidrar til å skille transformerte celler med ikke-transformerte celler. | Reportergen er et gen som bidrar til å kvantifisere ekspresjonen av det ønskede gen som er satt inn i vertscellen. |
| Naturen til enhetene produsert | |
| Generene er kodet med egenskaper som bidrar til kunstig utvelgelse på voksende medier. | Generene er kodet med visuelt identifiserbare egenskaper. |
| Bruk | |
| Antibiotikaresistensgener, antimetabolittgener, herbicidresistensgener, etc. er eksempler for selekterbar markør. | Generalkode for grønt fluorescerende protein, p-glukuronidase, kloramfenikol acetyltransferase, rødt fluorescerende protein, etc. er eksempler. |
Sammendrag - Valgbar markør vs Reporter Gene
Valgbare markører tillater transformerte celler å vokse i selektive medier dosert med bestemt antibiotika eller herbicid. De brukes til tidlig utvalg av transformerte celler. Reportergener brukes til å kvantifisere ekspressjonsnivået for det ønskede gen innført. De tillater også differensiering av transformerte og ikke-transformerte celler. Dette er forskjellen mellom selekterbar markør og reportergen.Både valgbar markør og reportergen betraktes som viktige markører innen genteknologi.
Referanser:
1. Ziemienowicz, Alicja. "Plantevalgbare markører og reportergener. “Springer. Springer-Verlag, n. d. Web. 23. mars 2017.
2. Shih, Chen-Han, Hsiao-Yin Chen, Hung-Chieh Lee og Huai-Jen Tsai. "Lilla kromoproteingen tjener som en ny markeringsmarkør for transgenese av Microalga Nannochloropsis oculata. "PLOS ONE. Public Library of Science, n. d. Web. 25. mar. 2017
Image Courtesy:
1. "Plasmid med innsats" Av Michael Jeltsch - Eget arbeid (CC BY-SA 4. 0) via Commons Wikimedia
2. "Reportergen" Av TransControl på en. wikipedia (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia
