Forskjell mellom AFLP og RFLP | AFLP vs RFLP
Nøkkelforskjell - AFLP vs RFLP
DNA-studier har en enorm betydning for å forstå og bestemme fylogenetiske relasjoner, diagnostisere genetiske sykdommer og kartlegge organismerens genomer. Flere teknikker assosiert med DNA analyse er også brukt for identifisering av et bestemt gen eller en DNA-sekvens i et basseng av ukjent DNA. De er kjent som molekylære markører. Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) og Restriksjon Fragment Length Polymorphism (RFLP) er to slike molekylære markører (metoder) utviklet i molekylærbiologi for å oppdage genetisk variasjon mellom organismer. Begge metodene er like viktige og har fordeler og ulemper. Hovedforskjellen mellom AFLP og RFLP er at AFLP involverer selektiv PCR-amplifisering av det spaltede DNA, mens RFLP ikke involverer selektiv PCR-amplifisering av DNA-fragmentene.
INNHOLD
en. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er AFLP
3. Hva er RFLP
4. Side ved side-sammenligning - AFLP vs RFLP
5. Sammendrag
Hva er AFLP?
AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) er et viktig verktøy innen molekylærbiologi og brukes i stor grad i genetisk variasjonsanalyse. AFLP er basert på den spesifikke PCR-amplifikasjonen av det fragmenterte genomiske DNA og påvisning av polymorfismen ved autoradiografer via gelelektroforese. AFLP bidrar mye til å identifisere genetiske forskjeller i stammer eller nært beslektede arter av ulike kongedømmer, inkludert planter, dyr, bakterier og sopp. AFLP kan utføres med små mengder ukjente DNA-prøver. Det krever ikke tidligere sekvenskunnskap og utforming av prober.
Strep av AFLP
- Isolering av DNA
- Spaltning av DNA med restriksjonsendonukleaser
- Ligering av de begrensede DNA-fragmentene med adaptere
- Selektiv amplifisering av fragmentene med spesifikk restriksjon Nettsteder
- Separasjon av PCR-produktene ved gelelektroforese
- Visualisering av gelmatrisen ved autoradiograph
AFLP er en mer sensitiv og reproduserbar metode som kan brukes i DNA-profilering av flere taxa, inkludert sopp, bakterier, planter og dyr uten forkunnskap om DNA-sekvenser. Det bidrar til å identifisere små forskjeller mellom individer i befolkninger på grunn av sin svært sensitive natur. AFLP er også viktig i genomkartlegging, rettsmedisinske studier, foreldetesting, genotyping, etc.
Figur 01: AFLP
Hva er RFLP?
Restriksjon Fragment Length Polymorphisms (RFLPs) er en teknikk som brukes til å detektere de genetiske variasjonene i homologe DNA-sekvenser.Det er den første metoden utviklet for DNA profilering. Organismer har unike DNA fingeravtrykk eller DNA profiler. RFLP tjener som et viktig verktøy for å analysere variasjonen mellom DNA-profiler av intraspesifikke eller nært beslægtede organismer, da homologe sekvenser har forskjellige restriksjonsseter (steder) som er unike for en bestemt organisme. Når homologt DNA spaltes med spesifikke restriksjonsendonukleaser, vil det resultere i forskjellige DNA-profiler som er unike for hver enkelt person. Derfor er rektor ved denne metoden påvisning av genetisk variasjon blant organismer ved å begrense homologt DNA med spesifikke restriksjonsenzymer og analyse av fragmentlengdespolymorfismen via gelelektroforese og blotting. Blottemønstre er unike for hver organisme og karakteriserer de spesifikke genotyper.
Trinn for RFLP
- Isolering av tilstrekkelig mengde DNA fra prøver
- Fragmentering av DNA-prøvene med spesifikke restriksjonsendonukleaser i kort sekvens
- Separering av de resulterende fragmentene med forskjellige lengder med agarosegelelektroforese.
- Overføring av gelprofilen til en membran ved Southern blotting
-
Hybridisering av membranen med merkede prober og analyse av fragmentlengdepolymorfismen i hver profil
RFLP er en meget viktig teknikk for å oppdage sykdomarv og å finne risiko for sykdomsforløpet blant familiemedlemmer. RFLP brukes også ofte i genomkartlegging, identifisering av kriminelle i rettsmedisin, faderskapstesting, etc. RFLP har også flere begrensninger. RFLP krever forkunnskap om sekvensdata for å designe prober for hybridisering. Det krever også isolering av tilstrekkelig mengde DNA fra prøven til analyse, noe som er vanskelig i rettsmedisinske studier.
Figur 01: RRFLP kartlegging
Hva er forskjellen mellom AFLP og RFLP?
- diff Artikkel Midt før tabell ->
ALFP vs RFLP |
|
| AFLP involverer selektiv PCR-amplifisering av det spaltede DNA. | RFLP involverer ikke PCR med mindre det er PCR-RFLP. |
| Sequence Knowledge | |
| Forkunnskapskunnskap er ikke nødvendig. | Forkunnskapskunnskap er nødvendig for å utforme RFLP-sonder. |
| Pålitelighet | |
| Dette er mer pålitelig. | Dette er mindre pålitelig sammenlignet med AFLP. |
| Effektivitet ved å oppdage polymorfisme | |
| Dette har en høyere effektivitet ved å oppdage polymorfisme enn RFLP. | Dette er mindre effektivt sammenlignet med AFLP. |
| Kostnad | |
| Dette er litt dyrt sammenlignet med RFLP. | Dette er billigere sammenlignet med AFLP. |
| Applikasjoner | |
| AFLPs har blitt brukt på genomskilt kartlegging, DNA fingeravtrykk, genetiske mangfoldsstudier, faderskapstesting og rettsmedisinering. | RFLP-analyse er et viktig verktøy i genomkartlegging, lokalisering av gener for genetiske lidelser, bestemmelse av risiko for sykdom og faderskapstesting. |
Sammendrag - AFLP vs RFLP
AFLP og RFLP er to teknikker brukt som genetiske markører for evaluering av mangfold og vurdering av de genetiske forholdene i molekylærbiologi.AFLP fungerer som en effektiv og sensitiv metode for påvisning av genetisk polymorfisme mellom organismer enn RFLP. Imidlertid, selv om begge disse metodene har forskjellige effektiviteter i å oppdage genetiske variasjoner, blir de fortsatt brukt til DNA fingeravtrykk og sykdomsdiagnose.
Referanse:
'1. Garcia, Antonio A. F., Luciana L. Benchimol, Antônia M. M. Barbosa, Isaias O. Geraldi, Souza Jr. Cláudio L. og Anete P. De Souza. "Sammenligning av RAPD, RFLP, AFLP og SSR markører for mangfoldighetsstudier i tropiske maisinavlede linjer. "Genetikk og molekylærbiologi. Sociedade Brasileira de Genética, 2004. Web. 19. mars 2017
2. "Restriksjon Fragment Length Polymorphism (RFLP). "Nasjonalt senter for bioteknologisk informasjon. U. S. National Library of Medicine, n. d. Web. 19. mars 2017
3. Masiga D. K. og Turner C. M. (2004). "Amplified (restriction) fragment length polymorphism (AFLP) analyse". Metoder Mol Biol: 270: 173-86. NCBI. Web. 19. mars 2017
Bilde Courtesy:
1. "ALFP" Av Barbarossa på nederlandsk Wikipedia - Overført fra nl. wikipedia til Commons. (Public Domain) via Commons Wikimedia
2. "RFLP-kartlegging" ved Retama - eget arbeid (GFDL) via Commons Wikimedia
